1 范围 本方法适用于食品中粗蛋白的含量测定。 2 原理 蛋白质是含氮的有机化合物。食品与硫酸和催化剂一同加热消化， 使蛋白质分解，分解的氮与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离， 用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数， 即为蛋白质含量。 3 试剂 3.1 试剂 3. 1.1 硫酸铜 3. 1.2 硫酸钾 3. 1.3 硫酸 3. 1.4 2%硼酸溶液 3. 1.5 混合指示液：1份0.1%甲基红乙醇溶液与5份0.1%溴甲酚绿乙醇溶液临用时混合。也可用2份0.1%甲基红乙醇溶液与1份0.1%次甲基蓝乙醇溶液临用时混合。 3. 1.6 40%氢氧化钠溶液。 3. 1.7 0.05N硫酸标准溶液或0.05N盐酸标准溶液。 4 仪器 4.1定氮蒸馏装置 5 试样制备 5.1 精密称取 0.2～ 2.0g 固体样品或 2～5g 半固体样品或吸取 10～20mL 液体样品（约相当氮 30～40mg），移入干燥的 100mL 或 500mL 定氮瓶中，加入 0.2g 硫酸铜，3g 硫酸钾及 20mL 硫酸，稍摇匀后于瓶口放一小漏斗，将瓶以45°角斜支于有小孔的石棉网上。小心加热，待内容物全部炭化，泡沫完全停止后，加强火力，并保持质瓶内液体微沸， 至液体呈蓝绿色澄清透明后，再继续加热 0.5h。取下放冷，小心加 20mL 水。放冷后，移入 100mL 容量瓶中，并用少量水洗定氮瓶，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度， 混匀备用。取与处理样品相同量的硫酸铜、硫酸钾、硫酸按同一方法做试剂空白试验。 6 操作步骤 6.1装好定氮装置，于水蒸气发生瓶内装水至约2/3处， 加甲基红指示液数滴及数毫升硫酸，以保持水呈酸性，加入数粒玻璃珠以防暴沸， 用调压器控制，加热煮沸水蒸气发生瓶内的水。 6.2 向接收瓶内加入 10mL2% 硼酸溶液及混合指示液1滴， 并冷凝管的下端插入液面下，吸取 10.0mL 样品消化稀释液由小玻杯流入反应室，认实并以 10mL 水洗涤小烧杯使流入反应室内， 塞紧小玻杯的蔑兔报棒状玻塞。将 10mL40% 氢氧化钠溶液倒入小玻杯，提起玻塞使其缓缓流入反应室，立即将玻塞盖紧， 并加水于小玻杯以防漏气。夹紧螺旋夹，开始蒸馏。 蒸气告泳通入反应室使氨通过冷凝管而进入接收瓶内，蒸馏 5min。移动接受瓶，使冷凝管下端离开液面，再蒸馏 1min。然后用少量水冲洗冷凝管下端外部。取下接收瓶，以 0.05N 硫酸或 0.05N 盐酸标准溶液滴定至灰色或蓝紫色为终点。 6.3 同时吸取 10.0mL 试剂空白消化液按6.2操作。 7 结果计算 7.1计算 (V1-V2)×N×0.014 X= ——————————— ×F×100 m×10÷100 式中： X—样品中蛋白质的含量，%； V1—样品消耗硫酸或盐酸标准液的体积，mL； V2—试剂空白消耗硫酸或盐酸标准液的体积，mL； N—硫酸或盐酸标准溶液的当量浓度； 0.014—1N硫酸或盐酸标准溶液 1mL 相当于氮克数； m—样品的质量（体积），g(mL)； F—氮换算为蛋白质的系数。蛋白质中的氮含量一般为15～17.6%，按 16%计算乘以6.25即为蛋白质，花生为5.46。